一道本视频在线-av日韩一区二区三区-国产精品自拍小视频-国产999精品久久久-妺妺窝人体色www聚色窝仙踪-国产伊人网-在线播放网址-色婷婷影院-欧美日韩免费一区二区三区-婷婷色婷婷-热久久国产-日韩免费视频-五月天激情图片-久久综合婷婷成人网站-欧美性生活-国产精品毛片av-日韩视频精品

  在生命科學研究的廣闊領域中，解析基因對蛋白質(zhì)功能的調(diào)控機制及蛋白質(zhì)間的相互作用網(wǎng)絡是揭開生命活動本質(zhì)的核心環(huán)節(jié)。酵母單雜交（Yeast One-Hybrid, Y1H）、酵母雙雜交（Yeast Two-Hybrid, Y2H）及酵母三雜交（Yeast Three-Hybrid, Y3H）系統(tǒng)作為該領域的經(jīng)典研究工具，共同構成了解析基因調(diào)控與生物分子互作的“利器組合”。

       酵母雜交技術的原理大多基于GAL4轉錄激活機制，GAL4作為一種酵母轉錄因子，其核心功能是激活下游基因的轉錄過程。GAL4結構上包含兩個關鍵功能域：一是位于N端1-147位氨基酸殘基區(qū)段的DNA結合域（DNA binding domain，BD），二是位于C端768-881位氨基酸殘基區(qū)段的轉錄激活域（Activation domain，AD）。其中，BD能夠特異性識別并結合基因上游的激活序列UAS（Upstream-activating sequence）；而AD的作用則是啟動UAS下游基因的轉錄。值得注意的是，BD與AD單獨存在時無法激活轉錄反應，只有當二者在空間上實現(xiàn)充分接近并形成功能復合體時，才能共同激活UAS下游的啟動子，進而促使啟動子下游的目標基因發(fā)生轉錄。

圖1 轉錄因子GAL4

       麥克林提供各類實驗用酵母雜交試劑，具有純度等級高、生產(chǎn)工藝先進、支持研發(fā)定制等特點，能被廣泛適用于各類科研項目、研究實驗中，歡迎選購。

       本文通過以下幾點介紹麥克林酵母雜交試劑的化學特性和相關應用：

        1. 酵母雙雜交系統(tǒng)工作原理

        2. 酵母單雜交系統(tǒng)工作原理

        3. 酵母三雜交系統(tǒng)工作原理

        4. 麥克林酵母雜交試劑產(chǎn)品介紹

1. 酵母雙雜交系統(tǒng)工作原理

       酵母雙雜交技術是解析蛋白質(zhì)互作的核心工具，根據(jù)靶標蛋白特性分為兩大關鍵系統(tǒng) —核系統(tǒng)與膜系統(tǒng)。

       核系統(tǒng)的工作原理主要基于GAL4的AD與BD作用特性。如圖2a所示，將目標蛋白A、B的基因分別克隆至BD、AD載體上，通過酵母細胞轉化技術將構建好的載體DNA-BD、DNA-AD轉化至酵母細胞中，使酵母細胞表達 A-BD 和 B-AD 融合蛋白。若 A 與 B 蛋白存在相互作用，二者在空間上會充分接近并形成功能復合體，可以重構 GAL4 的完整轉錄激活功能，進而激活下游報告基因（如HIS3、ADE2等）的表達，最終通過觀察缺陷型培養(yǎng)基上酵母細胞的生長情況或顯色反應，確定A、B蛋白是否存在相互作用。

       在膜系統(tǒng)酵母雙雜交體系中，由76個氨基酸殘基組成的泛素蛋白發(fā)揮著重要作用。如圖2b所示，高度保守的泛素被拆分為 C 端 Cub（融合轉錄因子 TF）和 N 端 NubG 兩個無獨立功能的片段，將蛋白A、B的基因分別克隆到Cub與Nub的表達載體上，并將構建好的載體轉化至酵母細胞，使酵母細胞分別表達出A-Cub-TF、B-NubG融合蛋白。當?shù)鞍譇與B在細胞膜上發(fā)生相互作用時，會牽引Cub與NubG空間上靠近并重構為完整泛素，泛素被泛素特異性蛋白酶（USP）識別剪切并釋放TF，TF進入細胞核后激活報告基因的表達，從而使得該系統(tǒng)可以通過使用缺素培養(yǎng)基以及菌株是否變藍進行陽性互作的篩選。

圖2 酵母雙雜交原理

2. 酵母單雜交系統(tǒng)工作原理

       酵母單雜交系統(tǒng)（Yeast One-Hybrid, Y1H）是在酵母雙雜交技術基礎上發(fā)展而來的，與酵母雙雜交相比，其核心差異在于不依賴 DNA 結合域（BD）的參與，是一種用于研究蛋白質(zhì)與特定 DNA 序列相互作用的技術。

       在 Y1H 實驗體系中，將目標 DNA 序列（Bait，啟動子或增強子片段）整合至酵母細胞的報告基因上游區(qū)域；同時，候選蛋白A與激活結構域（AD）融合后，在酵母細胞內(nèi)表達出A-AD融合蛋白。若候選蛋白質(zhì)與目標 DNA 序列發(fā)生特異性結合，便會激活報告基因表達，最終通過觀察缺陷型培養(yǎng)養(yǎng)上酵母細胞的生長情況或顯色反應，確定DNA與蛋白間是否存在特異性結合。

圖3 酵母單雜交原理

3. 酵母三雜交系統(tǒng)工作原理

       酵母三雜交系統(tǒng)在酵母雙雜交系統(tǒng)的基礎上，引入了能夠同時插入兩個外源蛋白的pBridge質(zhì)粒。實驗時將蛋白A與蛋白Bait X的基因同時構建到pBridge質(zhì)粒上，蛋白B基因構建到AD質(zhì)粒上，通過酵母細胞轉化技術將構建好的質(zhì)粒轉化至酵母細胞中，通過缺陷型平板上酵母細胞的生長狀態(tài)反映Bait X蛋白對其他兩種蛋白質(zhì)的作用方式。

        酵母三雜交可變性很強，Bait X可以通過多種方式參與互作：

        a)  若蛋白 A 與蛋白 B 不直接相互作用，Bait X 可作為 “橋梁” 促進二者互作（如圖 4a）；

        b)  通過修飾其中一個蛋白，使原本不直接互作的 A、B 產(chǎn)生相互作用（如圖 4b）；

        c)  蛋白 A 與蛋白 B 可直接相互作用，Bait X 則可能發(fā)揮抑制作用，導致二者的互作減弱甚至完全終止（如圖 4c）。

圖4 酵母三雜交原理

4. 麥克林酵母雜交試劑產(chǎn)品介紹

       麥克林酵母雜交產(chǎn)品線秉持“精準、高效、便捷”的核心定位，深度聚焦科研場景中的實際需求，包含酵母培養(yǎng)基、 DO Supplement 系列氨基酸缺失混合物、酵母感受態(tài)制備及轉化試劑等，旨在為科研人員提供從載體構建、菌株培養(yǎng)到篩選驗證的一站式實驗工具。

       借助麥克林 DO Supplement 系列氨基酸缺失混合物構建營養(yǎng)缺陷篩選體系，并結合其酵母轉染試劑保障載體高效導入，對 Protein A 與 Protein B 的互作關系進行驗證。如圖5所示，通過陰性對照（AD+BD、AD-Protein A+BD、AD+BD-Protein B）排除空載體互作和蛋白自身激活后，AD-Protein A 與 BD-Protein B 的組合在 SD/LTAH 平板上生長，證明Protein A 和 Protein B 存在相互作用。

圖5 麥克林酵母雙雜交實測圖

 上海騰準生物科技有限公司作為麥克林試劑全國授權經(jīng)銷商，可以為你提供更好的價格和服務。